exoEasy Maxi Kit，qiagen外泌體提取試劑盒 

exoEasy Maxi Kit(20) 

Cat.No./ID:76064

For 20 vesicle preps:20 exoEasy Maxi Spin Columns,Collection Tubes(50ml),Reagents and Buffers

exoEasy MaxiKit使用了膜親和離心柱來(lái)高效地從血漿、血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清及其他生物液體中提取獲得exosome及其他細(xì)胞外囊泡，Maxi規(guī)格的離心柱可允許外理大體積的樣品，包括高達(dá)4ml的而漿或而清，或者32ml的細(xì)胞培養(yǎng)上清，實(shí)驗(yàn)流程非?？焖僖恢?，非常適用于提取EV進(jìn)行exosome及其他細(xì)胞外囊泡的功能性分析。

Performance

用于純化外泌小體及其他細(xì)胞外囊泡的exoEasy實(shí)驗(yàn)方案不僅比超速離心更加快捷，而且可獲得更潔凈的純化產(chǎn)物。掃描電子顯微鏡顯示兩種技術(shù)均可提供完整的預(yù)期尺寸的囊泡，不過(guò)通過(guò)超速離心法制得的樣品中還含有一些并不符合EV尺寸或外形的更小的結(jié)構(gòu)。

提取獲得的囊泡具有完整的功能，可用于多種下游應(yīng)用，包括細(xì)胞培養(yǎng)等工作。洗脫的囊泡的性質(zhì)和數(shù)量可通過(guò)多種不同的方法進(jìn)行測(cè)定。其中包括電子顯微鏡、物理特征描述(例如，納米顆粒追蹤分析(NTA)，或可調(diào)電陰脈沖感應(yīng)(TRPS)微粒分子成分分析(例如蛋白質(zhì)核酸或脂米)等，由干如NTA或TRPS等微粒計(jì)數(shù)方法無(wú)法將囊泡與其他懸浮顆粒區(qū)分開，使用未經(jīng)處理的生物液體或仍含有其他顆粒物(例如，蛋白復(fù)合物)的粗制備樣品進(jìn)行顆粒計(jì)數(shù)可能會(huì)明顯地高估囊泡數(shù)目。 Principle

exoEasy Kit在傳統(tǒng)的超速離心exosome或微泡提取方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，可在25分鐘內(nèi)獲得純化的細(xì)胞外囊泡。

exoEasy Maxi Kit使用了膜親和結(jié)合步驟來(lái)從血漿、及血清或細(xì)胞培養(yǎng)上清中分離exosome及其他EV。這種方法無(wú)法通過(guò)大小或細(xì)胞來(lái)源對(duì)EV進(jìn)行區(qū)分，也不依賴干是否存在微粒表位，它運(yùn)用了囊泡的通用生化特性來(lái)提取樣品中的所有細(xì)胞外囊泡(參見(jiàn)圖片使用NTA對(duì)由exoEasyMaxiKit提取獲得的細(xì)胞外囊泡進(jìn)行性質(zhì)分析)。因此，必須*去除細(xì)胞、細(xì)胞碎片、凋廣小體等組分，可在開始提取步驟前對(duì)樣品進(jìn)行離心或過(guò)濾等操作。

Exosome Diaanostics.Inc.開發(fā)的技術(shù)使用了離心柱及專門的緩沖液來(lái)從預(yù)過(guò)濾的生物液體中純化exosome;口外理高達(dá)4 ml的血漿或而清。對(duì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清，經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證可從高達(dá)32ml的樣品中成功提取外泌小體(4次離心柱上樣步驟)。不過(guò)，上清中的囊泡濃度非常依賴于細(xì)胞類型及培養(yǎng)條件;因此我們建議，對(duì)于未經(jīng)過(guò)該試劑盒測(cè)試樣品材料，起始上清體積不要超過(guò)16ml。更高的樣品體積可能導(dǎo)致囊泡的回收率降低。實(shí)驗(yàn)流程非?？焖僖恢?，非常適用于exosome及其他細(xì)胞外囊泡的功能性分析。除囊泡之外的懸浮顆粒絕大部分可在結(jié)合及清洗步驟中被去除，這種顆粒包括了大體積的蛋白復(fù)合物，其在血漿及血清中含量很高。

 Procedure

提取細(xì)胞外囊泡的總流程僅需要25分鐘。將預(yù)先過(guò)濾過(guò)的而漿，而清或細(xì)胞培養(yǎng)上清(去除了尺寸大干0.8um的顆粒)與 Buffer XBP進(jìn)行混合并結(jié)合在exoEasv膜親和第心柱上。對(duì)結(jié)合的外泌小體使里Buffer XWP進(jìn)行清洗，并隨后使用400ul Buffer XE(主要含無(wú)機(jī)鹽的水緩沖液)進(jìn)行洗脫，隨后即可用于物理或生化分析。對(duì)于特定應(yīng)用，如生物檢測(cè)等，可能需要進(jìn)行額外的濃縮或緩沖液置換步驟。此步驟可通過(guò)孔徑尺寸為100kDa或更小的超濾方法來(lái)實(shí)現(xiàn)。 

Applications

exoEasy Kit非常適合于從血漿、血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清及其他生物液體中提取微囊泡。提取獲得的囊泡可用于如下應(yīng)用進(jìn)行分析:

· 物理性質(zhì)分析(例如，NTA，TRPS)

· 電子昂微鏡

· 提取并分析DNA、RNA*、蛋白質(zhì)、脂類及其他成分

· 流式細(xì)胞術(shù)

· 抗體或熒光染料標(biāo)記

· 受體細(xì)胞的攝取

*如需提取囊泡RNA，我們推薦使用exoRNeasv試劑盒。